A la mort de François Ier en 1547, son fils Henri II reprend la lutte contre Charles Quint en s'alliant avec le pape Paul III et les princes protestants allemands. Après quelques succès dans le nord de la France et en Italie, l'empereur accepte une trêve en 1556 qui sera de courte durée.
Charles Quint, malade et fatigué, abdique en faveur de son fils Philippe qui reçoit la couronne d'Espagne et de son frère Ferdinand qui devient empereur germanique.
Henri II rompt la trêve en voulant chasser les espagnols d'Italie, mais les résultats sont décevants et bientôt les Français doivent évacuer l'Italie car l'armée espagnole menace leurs frontières au nord. Le 10 août 1557, ils subissent une grave défaite à Saint Quentin.
Mais après quarante années de guerre, les maisons de Habsbourg et de France sont épuisées financièrement et militairement. La paix de Cateau-Cambrésis, conclue le 3 avril 1559, est un accord sans vainqueur. Il met cependant fin aux expéditions dans la péninsule italienne.
Un double mariage princier accompagne cette paix : le roi d'Espagne Philippe II épouse Elisabeth, la fille d'Henri II, et le duc de Savoie Emmanuel-Philibert épouse Marguerite, sœur d'Henri II. Pour fêter cette double union, un tournoi est organisé place des Tournelles, à Paris. Au cours d'une joute, Henri II est mortellement blessé d'un coup de lance accidentel par le comte Gabriel de Montgomery.

Ainsi se terminent les guerres d'Italie qui étaient devenues pour la noblesse française une terre d'aventures et de richesses faciles à piller. Elles auront vu évoluer au cours des différents conflits, les techniques de guerre avec, notamment l'apparition des armes à feu et l'artillerie.